Thèse une Nouvelle Cible Thérapeutique dans l'Avc Effets à Long Terme de la Modulation de l'Ampc dans un Modèle Murin et Analyse Mécanistique In Vitro H/F - Doctorat.Gouv.Fr

Établissement : Université Claude Bernard Lyon 1 École doctorale : EDISS - Interdisciplinaire Sciences-Santé Laboratoire de recherche : CARMEN - LABORATOIRE DE RECHERCHE EN CARDIOVASCULAIRE, MÉTABOLISME, DIABÉTOLOGIE ET NUTRITION Direction de la thèse : Marlène WIART ORCID 0000000303267002 Début de la thèse : 2026-10-01 Date limite de candidature : 2026-06-03T23:59:59 L'accident vasculaire cérébral (AVC) est une maladie fréquente et invalidante. Comprendre les mécanismes physiopathologiques impliqués dans la formation des lésions cérébrales suite à un AVC est une priorité pour développer de nouvelles stratégies thérapeutiques. Des études expérimentales ont montré que l'élévation de la concentration intracellulaire d'adénosine monophosphate cyclique (AMPc) pouvait limiter les dommages cérébraux suite à un AVC. Les données récentes de la littérature montrent que la modulation d'une protéine effectrice de l'AMPc pourrait être une cible thérapeutique dans l'AVC. Nos données préliminaires confirment l'effet protecteur de l'activation de cette protéine d'intérêt dans les premiers jours suivant l'induction d'un AVC chez la souris. L'objectif du projet de thèse est de fournir une preuve de l'efficacité thérapeutique à long terme de l'activation cette protéine d'intérêt dans l'AVC. Pour cela, nous allons combiner des modèles in vitro d'AVC (culture primaire de neurones et de microglies sous hypoxie-réoxygénation) et un modèle d'AVC chez la souris, avec un suivi longitudinal comprenant des tests neurocomportementaux et l'IRM multiparamétrique. A terme, cette nouvelle approche thérapeutique pourrait être appliquée chez l'humain pour limiter les dommages cérébraux suite à un AVC. Chaque année 155000 personnes sont victimes d'un AVC en France. L'AVC ischémique, dû à l'occlusion d'une artère cérébrale, représente 80 % des cas. La thrombectomie a révolutionné la prise en charge de ces patients. Cependant, plus de la moitié d'entre eux conservent des séquelles neurologiques à long terme. Il est donc urgent de développer de nouvelles thérapies afin de protéger le cerveau après un AVC et donc de limiter la mortalité et le handicap des patients victimes d'un AVC.
Dans les premières heures suivant un AVC, une cascade ischémique complexe se met en place. Le rétablissement de la circulation cérébrale, bien que globalement bénéfique, peut induire des lésions de reperfusion qui s'ajoutent aux dommages initiaux. Une réponse neuro-inflammatoire se développe rapidement. Un dysfonctionnement de la barrière hémato-encéphalique (BHE) et un oedème cérébral peuvent induire des lésions secondaires. Dans ce contexte, une intervention thérapeutique adjuvante à la recanalisation de l'artère doit être mise en oeuvre le plus tôt possible.

Le second messager adénosine monophosphate cyclique (AMPc) régule de nombreux processus cellulaires, dont l'inflammation. Des études expérimentales pionnières ont montré que l'augmentation de l'AMPc pouvait atténuer les lésions cérébrales consécutives à un AVC, notamment par une réduction de la neuroinflammation (Xin et al 2020 ; Ponsaert et al 2021). L'implication de protéines effectrices de l'AMPc a été récemment mise en évidence lors de la phase aiguë de l'AVC (Chu et al ; Sun et al 2023). Sur la base de ces données bibliographiques et de nos résultats préliminaires, nous postulons qu'une protéine sensible à l'AMPc que nous avons identifiée dans nos travaux antérieurs pourrait représenter une cible thérapeutique prometteuse dans l'AVC ischémique.

Nous avons obtenu un financement d'Inserm Transfert preuve de concept en 2022 afin de tester la modulation in vivo de l'AMPc dans l'AVC. Nous avons montré que l'activation d'une protéine d'intérêt sensible à l'AMPc améliorait le devenir des souris dans les premières 24h. Nous avons ensuite obtenu un financement du Fonds pour la Recherche sur les AVC pour étendre la fenêtre d'analyse. Le protocole à 72h est en cours d'acquisition et d'analyse, avec des résultats préliminaires encourageants.

Hypothèses :
1) L'activation de l'AMPc réduit la mortalité cellulaire et limite le handicap suite à un AVC, en régulant la neuroinflammation, l'ouverture de la barrière hémato-encéphalique (BHE) et l'oedème ;
2) Ces effets sont maintenus plusieurs semaines après la survenue de l'AVC.

Les objectifs spécifiques du projet doctoral sont :
1) d'évaluer si les effets protecteurs de l'activation d'une protéine sensible à l'AMPc déjà observés par notre équipe dans les premiers jours suivant la survenue d'un AVC se maintiennent à long terme ;
2) d'élucider les mécanismes sous-jacents afin de favoriser le transfert clinique. Etudier les effets à long terme de la modulation de l'AMPc dans un modèle murin d'AVC Axe 1- Évaluation longitudinale in vivo de l'impact de l'activation de l'AMPc après un AVC

Nous utiliserons notre modèle murin in vivo d'AVC ischémique (Ong et al Neurotherapeutics) pour tester les effets de l'activation d'une protéine sensible à l'APMc par son agoniste sélectif au cours des 6 premières semaines post-AVC. L'IRM longitudinale multiparamétrique permettra d'évaluer l'oedème, l'hémodynamique, la perméabilité de la BHE, l'activation microgliale et le connectome (Gurler et al Scientific reports). Des tests neurocomportementaux seront réalisés en parallèle (neuroscore, tests sensorimoteurs et de mémoire) (Dumot et al). Des groupes d'animaux seront sacrifiés à intervalles réguliers pour compléter l'approche par des analyses ex vivo.

Axe 2- Détermination des mécanismes sous-jacents

Nous étudierons les mécanismes sous-jacents en combinant l'analyses des échantillons ex vivo et l'utilisation de modèles in vitro d'AVC.
Le sang et le cerveau des animaux des animaux sacrifiés à différents temps lors de l'étude in vivo seront analysées par ELISA, cytométrie de flux et immunohistologie, afin de tester l'hypothèse d'un effet modulateur de l'inflammation et de la réponse immune.
Les modèles in vitro d'AVC consistent en une culture primaire de microglies et de neurones soumise à une privation d'oxygène et de glucose avec l'ajout de l'agoniste sélectif au moment de la réoxygénation. L'isolement des cellules microgliales de souris KO pour la protéine sensible à l'AMPc permettra de valider la spécificité de l'activation pharmacologique de l'AMPc.

- Master 2 recherche ou diplôme équivalent
- Connaissances solides en neurosciences
- Compétences en neurocomportement, IRM cérébrale, cytométrie de flux
- Motivation, rigueur, curiosité, autonomie
- Anglais lu, écrit, parlé